一、目的
本規程旨在為無菌操作及無菌室的保護提供一個標準化規程。
 

二、安全注意事項
嚴格無菌操作，防止微生物污染；操作人員進入無菌室應先關掉紫外燈。
 

三、規程

3.1  無菌室應設有無菌操作間和緩沖間，無菌操作間潔凈度應達到10 000級，室內溫度保持在20-24℃，濕度保持在45-60%。超凈臺潔凈度應達到100級。

3.2  無菌室應保持清潔，嚴禁堆放雜物，以防污染。

3.3  嚴防一切滅菌器材和培養基污染，已污染者應停止使用。

3.4  無菌室應備有工作濃度的消毒液，如5%的甲酚溶液，70%的酒精，0.1%的新潔爾滅溶液，等等。

3.5  無菌室應定期用適宜的消毒液滅菌清潔，以保證無菌室的潔凈度符合要求。

3.6  需要帶入無菌室使用的儀器，器械，平皿等一切物品，均應包扎嚴密，并應經過適宜的方法滅菌。

3.7  工作人員進入無菌室前，必須用肥皂或消毒液洗手消毒，然后在緩沖間更換專用工作服，鞋，帽子，口罩和手套(或用70%的乙醇再次擦拭雙手)，方可進入無菌室進行操作。

3.8  無菌室使用前必須打開無菌室的紫外燈輻照滅菌30分鐘以上，并且同時打開超凈臺進行吹風。操作完畢，應及時清理無菌室，再用紫外燈輻照滅菌20分鐘。

3.9  供試品在檢查前，應保持外包裝完整，不得開啟，以防污染。檢查前，用70％的酒精棉球消毒外表面。

3.10  每次操作過程中，均應做陰性對照，以檢查無菌操作的可靠性。

3 .11  吸取菌液時，必須用吸耳球吸取，切勿直接用口接觸吸管。

3.12  接種針每次使用前后，必須通過火焰灼燒滅菌，待冷卻后，方可接種培養物。

3.13  帶有菌液的吸管，試管，培養皿等器皿應浸泡在盛有5%來蘇爾溶液的消毒桶內消毒，24小時后取出沖洗。

3.14  如有菌液灑在桌上或地上，應立即用5%石碳酸溶液或3％的來蘇爾傾覆在被污染處**少30分鐘，再做處理。工作衣帽等受到菌液污染時，應立即脫去，高壓蒸汽滅菌后洗滌。

3.15  凡帶有活菌的物品，必須經消毒后，才能在水龍頭下沖洗，嚴禁污染下水道。

3.16  無菌室應每月檢查菌落數。在超凈工作臺開啟的狀態下，取內徑90 mm的無菌培養皿若干，無菌操作分別注入融化并冷卻**約45℃的營養瓊脂培養基約15 ml，放**凝固后，倒置于30～35℃培養箱培養48小時，證明無菌后，取平板3～5個，分別放置工作位置的左中右等處，開蓋暴露30分鐘后，倒置于30～35℃培養箱培養48小時，取出檢查。100級潔凈區平板雜菌數平均不得超過1個菌落，10 000級潔凈室平均不得超過3個菌落。如超過限度，應對無菌室進行徹底消毒，直**重復檢查合乎要求為止。