細胞培養中常見的污染情況總結如下:

常見的污染如下：

1、細菌：細菌在普通倒置顯微鏡下為黑色細沙狀，根據感染細菌的不同，可有不同的外形，培養液一般會渾濁變黃，對細胞生長影響明顯。仔細檢查一下器皿的滅菌情況，是否在高壓滅菌時放氣時間足夠，壓力足夠！尤其是和儲存培養液接觸的移液管等物品，連續兩次污染的話有可能造成儲存液污染，一定要注意！下次使用前檢查一下培養液是否存在渾濁的現象！可在培養液中加相應的抗生素處理

2、霉菌：培養液是清亮的，倒置顯微鏡下無雜質，37度孵箱培養2-3天，仍清亮，但出現絮狀雜質，鏡下可見呈細絲狀的團狀漂浮物，可看到明顯的菌絲，細胞仍可生長，但時間長之后，細胞的活力狀態變差，用硫酸銅溶液擦拭CO2孵箱內，再把水盤里也加上飽和量的硫酸銅。或者在培養箱的托盤加入飽和的消毒磷酸氫二鈉高鹽液體,可以防止霉菌污染。CO2孵箱被霉菌污染后，可把所有細胞暫時轉移，采用過氧乙酸擦洗孵箱（包括隔板，箱壁）。并把過氧乙酸放置在孵箱內一個小時，使其蒸汽彌漫。待過氧乙酸的氣味消散后，再移入細胞。孵箱應定期清潔（2月左右），尤其在多雨的季節。其它培養箱清洗方法是：用84液擦洗－清水擦洗－75%酒精擦洗－紫外燈照。預防霉菌污染，可在培養基里加3u/ml的兩性霉素或制霉菌素或放線菌素D或雙抗；但細胞一旦污染，很難挽救，制霉菌素或放線菌素D或雙抗都于事無補，建議舍棄該污染細胞。，將環境徹底消毒，如果所有細胞都污染，可能是系統污染，檢查一下培養基和器材，如果只是個別污染，可能是操作問題，就要注意操作

3、支原體：黑色的，好象多為多形，培養液一般培養液一般會渾濁，原體感染，G內血清很多都沒有做支原體陰性檢測，而支原體是牛血清中**常見的微生物之一。而且它不能用過濾的辦法除去。支原體感染細胞以后，細胞病變不很明顯，只是慢慢死去。用泰樂菌素，獸用支原體病的藥，但可用于細胞培養，無任何不良反應。Sigma公司的使用時用50ug/ml Tylosin培養液培養6天或連續傳兩代即可清除支原體污染。如果作為常用的抗生素的話, 建議用8ug/ml的濃度。

4、黑蛟蟲：可以穿透濾膜，也可以通過空氣傳播，低倍下為黑色點狀，高倍下可看見黑色的小蟲游來游去，培養液也是不渾的，一般不會太影響，細胞還是可以用的。常常是細胞生長狀態良好，且觀測到的運動物無明顯增多，且培養液顏色、透明度無明顯變化，可在同一批號的血清養的細胞中發現類似現象。對細胞生長狀態不會有明顯影響，在細胞增殖旺盛之后會自然消失，除更換血清外無須特殊處理。建議如果細胞有可能是此種污染的話，可以增加細胞的種板密度，以提高細胞的生存率。

5、真菌：一般培養液清亮，不變色，鏡下有絲狀物，有些真菌開始很像死細胞碎片，只是它很多很多的小塊很清楚，象珊瑚狀，不象細胞碎片分不清，慢慢的會長出很細的黑色絲狀物。真菌生長的比較慢，不象細菌那么容易被發現，但是一旦發現有它的存在細胞就被污染了，也很難救活了。

6、原蟲：培養液可輕微渾濁，顯微鏡下那些細小的點狀物數量非常多，輕微活動，細胞雖然可以生長但繁殖速度卻明顯減慢，而且細胞狀態不好，邊緣不清楚，細胞不透亮。他們與細胞可共生但會與細胞爭奪營養。這種共生是非常普遍的，但他們的數量小，細胞站優勢所以不會影響到細胞的正常生長，只有當他們到達一定的數量時就會影響到細胞的生長，**終形成惡性循環。

污染的可能原因：可能原因很多比如配液消毒問題、操作問題、環境問題等等

關于培養基的無菌狀況，取培養基**培養瓶中（不加細胞），37度試培養一段時間后觀察。如果沒有細菌生長 就是操作的問題。也可以在培養基中事先加入雙抗（硫酸鏈霉素和氨芐青霉素）。但雙抗有時會影響細胞的狀態，所以在做轉染、檢測細胞某項指標前一定要撤去雙抗，以避免影響實驗結果。

1、孵箱應定期用三氧機消毒 或者 紫外光照射，并用酒精和新潔爾滅試擦孵箱同時孵箱內的水應是三蒸水。

2、超凈臺、取材、器材、培養液、培養瓶、操作等因素。

3、超凈臺的風機不能過大，風機到6-8格。否則也可能能致霉菌污染。

4、無菌室經甲醛熏蒸消毒后，可用同等量的氨水噴灑中和，約幾小時即可進入操作。

關于黑膠蟲：根據平時的操作，我覺得“黑膠蟲”有沒有可能是以下操作細節方面的問題導致的呢？

1、有時候血清瓶或者培養瓶上用標記筆寫的字沒有擦掉就直接泡酸，字跡溶解后沉積在酸缸中浸泡的瓶子里沖洗不凈。

2、過火的時候不小心碰到酒精燈的燈芯，粉塵飛進培養液內。

3、有的同學習慣將移液管塞棉花的一端在酒精燈上焚燒一下，灰燼飛進培養液內。

我的細胞污染探索。某天打開孵箱，看到我的L1210的培養瓶培養液又是黃黃的，覺得很不錯，今天又可以傳代了，可是在鏡下一看，細胞雖然明顯增加了，但并沒有象以前那樣長滿，而且更讓我心驚的是怎么出現了許多黑色的小點，桿狀，而且好像在動來動去，翻轉，旋轉，在細胞很多的地方小點就少，而在細胞較少的地方小點就多，細胞的活力也沒有以前好了，**反應細菌污染，請實驗室老師過來看，說不是細菌污染，這個點要比細菌的小黑點大的多，也好象不是霉菌，沒有菌絲，沒有常見的團壯的生長，肯定不對勁，但到底是什么，說不上來。**后，決定換液、洗滌、離心，換瓶，操作結束后鏡下看黑點幾乎看不到了，有點放下心來。隔天后去看，培養液還和上面的一樣，但鏡下，那種東西又出來了，在細胞少的地方，幾乎呈現出粗砂粒樣，我欲哭無淚，知道可能不行了，郁悶的換液后，回家上網·搜，一個名詞跳了出來：黑膠蟲。黑色、桿狀、運動、細胞不會很快死亡，這些描述簡直驚人的一致，我確定了，我受到了黑膠蟲的襲擊。但黑膠蟲是什么，由于網上說法不一，我決定探究一下。shou先，培養液略黃，稍有渾濁，鏡下觀察，細胞還沒有死，但是已經不長了，那種東西已經是鋪天蓋地了，滿眼望去，盡是粗砂粒樣，細胞好像成了一個個汪洋中的小島。細胞涂片，送到化驗室，革蘭氏染色，不久電話回報懷疑－－真菌。**反應不可能，親自去了化驗室，看到了片上一個個瓜子樣的小點，染色呈黑色。看我還有些懷疑，化驗室的同事又作了滴片，鏡下暗視野40倍可見一個個亮白色芝麻樣的東西在游來游去，再次涂片染色仍和以前一樣，并且可以見到芽孢樣的形狀，他們確定無疑是真菌，但不是常見的念珠軍、霉菌，具體是什么，也說不上來。由于已經蓋棺定論，計劃的HE染色、支原體沒有進行。已經將污染的細胞扔掉了。休整幾天。附照片。

污染后(1)

污染后(2)

染色后