1. 目的：本規(guī)程旨在為無菌操作及無菌室的維護(hù)提供一個(gè)標(biāo)準(zhǔn)化規(guī)程。 2. 范圍：微生物檢測實(shí)驗(yàn)室。 

3. 職責(zé)：實(shí)驗(yàn)室工程師、實(shí)驗(yàn)室技術(shù)員對實(shí)施負(fù)責(zé)。 4. 內(nèi)容： 

4.1 無菌室應(yīng)設(shè)有無菌操作間，無菌操作間潔凈度應(yīng)達(dá)到10000級維持在20-24℃，濕度保持在45-60%。超凈工作臺潔凈度應(yīng)達(dá)到100級。 

4.2 無菌室應(yīng)保持清潔，嚴(yán)禁堆放雜物，以防污染。 4.3 嚴(yán)防一切滅菌器材和培養(yǎng)基污染，已污染者應(yīng)停止使用。 4.4 無菌室應(yīng)備有工作濃度的消毒液，如75%酒精、5%84消毒液等。 

4.5無菌室應(yīng)定期用干凈的布進(jìn)行清洗且用適宜的消毒液及紫外燈滅菌清潔并開啟空氣自凈化系統(tǒng)，以保證無菌室的潔凈度符合要求。 

4.6 需要帶入無菌室使用的儀器，器械，培養(yǎng)皿等一切物品，均應(yīng)包扎嚴(yán)密，并應(yīng)經(jīng)過適宜的方法滅菌。 4.7 工作人員進(jìn)入無菌室前，必須用肥皂或者消毒液洗手消毒，然后再更衣室更換專用干凈的工作服、鞋子、帽子、口罩和手套（或用75%酒精再次擦拭雙手），在經(jīng)過風(fēng)淋室的吹掃，方可進(jìn)入無菌室進(jìn)行操作。 

4.8 無菌室使用前必須打開無菌室的紫外燈輻照1h以上，并且同時(shí)打開超凈工作臺進(jìn)行吹風(fēng)。實(shí)驗(yàn)操作完畢，應(yīng)及時(shí)清理無菌室，收拾清洗并且消毒超凈工作臺。再用紫外燈輻照滅菌1h以上。 

4.9 供試品在檢查前，應(yīng)保持外包裝完整，不得開啟，以防污染。檢查前，用75%的酒精棉球消毒外表面。 4.10 每次操作過程中，均應(yīng)做陰性對照，以檢查無菌操作的可靠性。  4.11 吸取菌液時(shí)，必須用洗耳球吸取，切勿直接用口接觸吸管。 

4.12 接種針每次使用前后，必須通過火焰灼燒滅菌，待冷卻后，方可接種培養(yǎng)物。 

4.13 帶有菌液的吸管、試管、培養(yǎng)皿、錐形瓶等器皿應(yīng)于立式滅菌鍋（121℃ ，45min）高溫高壓滅菌，待到立式滅菌鍋壓力降為0，方可取出沖洗，晾干。帶有菌液的霧化器等不宜用高溫高壓滅菌的應(yīng)浸泡在盛有5%84消毒液的消毒桶內(nèi)消毒，24小時(shí)后取出沖洗。 

4.14 如有菌液灑在桌上或地上，應(yīng)立即用5%84消毒溶液或75%酒精傾覆在被污染處**少30分鐘，再做處理。工作服、帽子、鞋子等受到菌液污染時(shí)，應(yīng)立即脫去，置于立式滅菌鍋（121℃ ，45min）高溫高壓滅菌后洗滌，晾干，再紫外燈輻照殺菌。 

4.14 凡帶有活菌的物品，必須經(jīng)消毒滅菌后，才可在水龍頭下沖洗，嚴(yán)禁未消毒滅菌的物品隨意丟棄或者排放。 

4.15 無菌室應(yīng)每月檢查菌落數(shù)。在超凈工作臺開啟的狀態(tài)下，取內(nèi)徑為90mm的無菌培養(yǎng)皿若干，無菌操作下分別注入融化并冷卻約45℃的營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基約25-30ml，放**凝固后，倒置于36±1℃的恒溫培養(yǎng)箱里培養(yǎng)24-48h，證明無菌后，取無菌平板3～5個(gè)，分別放置工作位置的左中右等處，開蓋暴露30min后，倒置于36±1℃的恒溫培養(yǎng)箱里培養(yǎng)24-48h，取出檢查。10000級潔凈室平均不超過3個(gè)菌落。如超過限度，應(yīng)對無菌室進(jìn)行徹底消毒，直**重復(fù)檢查合格為止。 

5.安全注意事項(xiàng)：嚴(yán)格無菌操作，防止微生物污染；操作人員進(jìn)入無菌室前應(yīng)先關(guān)掉紫外燈。 6.參照文獻(xiàn) 

《藥品衛(wèi)生檢驗(yàn)方法》  

《中G藥品檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)范》中 (無菌檢查法)章節(jié)  

中華人民共和G醫(yī)藥行業(yè)標(biāo)準(zhǔn) YY/T0188.6-1995《藥品檢驗(yàn)操作規(guī)程》